禽多殺性巴氏桿菌ompa基因在Vero細胞中的表達

利用PCR技術(shù)擴增出禽多殺性巴氏桿菌1 050 bp的ompa基因片段,克隆到pUCm-T載體上,再亞克隆到真核載體pcDNA3.1(+)上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pCA(pcDNA3.1-OmpA),將該重組質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染Vero細胞,檢測其轉(zhuǎn)錄和表達情況.結(jié)果表明重組質(zhì)粒pCA構(gòu)建成功,通過RT-PCR由轉(zhuǎn)染了重組質(zhì)粒的Vero細胞中擴增出了目的條帶,間接免疫熒光試驗分析表明在轉(zhuǎn)染了pCA的Vero細胞中出現(xiàn)綠色熒光,Western blotting分析顯示重組質(zhì)粒pCA轉(zhuǎn)染的Vero細胞泳道出現(xiàn)約37.5ku的特異條帶,說明ompa基因在Vero細胞中成功表達了活性蛋白,從而為進一步研究禽多殺性巴氏桿菌ompa DNA疫苗的免疫效果奠定了基礎(chǔ).

作 者： 宮強 牛明福 秦翠麗 張敏 孫曉菲 王帥濤 程銘   作者單位： 河南科技大學(xué),河南洛陽,471003  刊 名： 中國家禽  PKU 英文刊名： CHINA POULTRY  年，卷(期)： 2010 32(8)  分類號：   關(guān)鍵詞： 禽多殺性巴氏桿菌   ompa基因   RT-PCR   間接免疫熒光試驗  

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