釀酒酵母HOR2基因缺失突變株的構建

目的:構建釀酒酵母HOR2基因缺失的突變株并研究其對甘油和乙醇產造的影響.方法:以PCR為基礎,通過同源重組的方式使目的基因缺失.結果:通過設計含有與HOR2(GPP2)基因兩側序列同源的長引物,以質粒PUG6為模板進行PCR構建含有Cre/loxP系統(tǒng)的釀酒酵母HOR2基因敲除組件,轉化釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS,獲得為loxP-kan-loxP序列組件所替換而產生kan'的陽性克隆子.然后再將質粒PSH65轉入陽性克隆子誘導表達Cre酶切除篩選標記,在原ORF基因處保留一個loxP位點,丟失質粒后獲得HOR2單倍體缺陷型菌株.重復轉化敲除組件實現(xiàn)另一條等位基因的敲除.發(fā)酵實驗表明,突變株甘油產量降低3.34%,乙醇產量提高1.96%.結論:成功獲得了釀酒酵母HOR2基因缺失的突變株,并命名為YS_2-HOR2.

作 者： 陳永金 林曉華 王艷尊 雷娟娟 黃建忠   作者單位： 福建師范大學生命科學學院,工業(yè)微生物教育部工程研究中心,福建現(xiàn)代發(fā)酵技術工程研究中心,福建福州350108  刊 名： 生物技術  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 20(2)  分類號： Q785  關鍵詞： 釀酒酵母   HOR2基因   基因敲除   乙醇   甘油   Saccharomyces cerevisiae   HOR2 gene   gene knockout   ethanol   glycerol  

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