Aeropyrum pernix K1磷脂酶A2的克隆、表達(dá)及其性質(zhì)

從超嗜熱需氧古細(xì)菌Aeropyrum pernix K1中抽提出染色體基因組,經(jīng)PCR擴(kuò)增得到磷脂酶A2基因,用帶有His-tag標(biāo)記的pET15b作為表達(dá)載體,在大腸桿菌BLP中成功地誘導(dǎo)表達(dá).表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)過Ni-螯合柱一步得到純化.SDS-PAGE檢測只有一條帶,其準(zhǔn)確分子量為17,871kD.對純化后的磷脂酶A2測定其酶活性和生物活性,得出其最適反應(yīng)溫度為90℃,最適pH范圍為7.8～8.2.至此首次成功地在大腸桿菌中表達(dá)了古細(xì)菌嗜熱磷脂酶A2,這將為以后對該酶的結(jié)構(gòu)和功能以及耐熱機(jī)制研究打下很好的基礎(chǔ),同時有利于古細(xì)菌研究領(lǐng)域的擴(kuò)展.

作 者： 盧冬梅 吳英松 解桂秋 高仁鈞 王智 曹淑桂 馮雁   作者單位： 盧冬梅,吳英松(廣州市達(dá)瑞抗體工程技術(shù)有限公司,廣州,510665)

解桂秋,高仁鈞,王智,曹淑桂,馮雁(吉林大學(xué)分子酶學(xué)工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,長春,130023) 

刊 名： 微生物學(xué)通報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： MICROBIOLOGY  年，卷(期)： 2006 33(5)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： Aeropyrum pernix K1   磷脂酶A2   古細(xì)菌   熱穩(wěn)定性  

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