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大鼠對氧磷酶1真核表達載體的構(gòu)建及在體外的表達
目的 構(gòu)建大鼠對氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)真核表達載體,并檢測其在體外培養(yǎng)細胞中的表達及功能,為進一步探索運用其進行基因防治肺部感染奠定基礎(chǔ).方法 利用RT-PCR擴增大鼠PON1編碼區(qū)全長序列,克隆入pcDNA 3.1(+),鑒定無誤后,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染A549細胞及293細胞, Western印跡檢測蛋白表達,并檢測其芳香酯酶活性及對銅綠假單胞菌密度感知系統(tǒng)信號分子N-;呓z氨酸內(nèi)酯(N-acylhomoserine lactones,AHLs)的水解功能.結(jié)果 分別從大鼠肝組織中擴增出1 153 bp片段,克隆入表達載體后進行酶切鑒定和測序結(jié)果正確.轉(zhuǎn)染細胞后能夠表達目的 蛋白,該蛋白具有芳香酯酶和AHLs內(nèi)酯酶活性.結(jié)論 成功構(gòu)建了含有大鼠PON1真核表達載體,質(zhì)粒能夠在真核細胞中表達,能夠有效地水解銅綠假單胞菌密度感知系統(tǒng)信號分子.
作 者: 楊碩 熊盛道 熊維寧 許淑云 史雪梅 徐國鵬 蘭芬 陸小霞 胡瓊潔 YANG Shuo XIONG Shengdao XIONG Weining XU Shuyun SHI Xuemei XU Guopeng LAN Fen LU Xiaoxia HU Qiongjie 作者單位: 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院呼吸內(nèi)科,衛(wèi)生部呼吸病重點實驗室,武漢市,430030 刊 名: 醫(yī)學分子生物學雜志 ISTIC 英文刊名: JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY 年,卷(期): 2008 5(3) 分類號: Q784 關(guān)鍵詞: 銅綠假單胞菌 對氧磷酶 密度感知 基因的表達與調(diào)控【大鼠對氧磷酶1真核表達載體的構(gòu)建及在體外的表達】相關(guān)文章:
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